cDNA-Chips - Herstellung und Anwendung

RNA-Isolierung

Mit Hilfe der fertigen cDNA-Chips kann man nun zum Beispiel testen, ob bestimmte Gene in einem Gewebe exprimiert werden. Dazu benötigt man eine Gewebeprobe, aus der die RNA isoliert wird. Da RNA enzymatisch sehr schnell abgebaut wird, arbeitet man bei sehr geringen Temperaturen. Alle Gefäße und die Gewebeprobe werden in flüssigem Stickstoff gekühlt (-196 °C).

Um die RNA aus den Zellen zu isolieren, müssen die Zellen zerstört werden. Dazu kommt das gekühlte Gewebe zusammen mit einer Metallkugel in ein Gefäß, das sehr schnell geschüttelt wird. Dabei pulversisiert die Metallkugel das gefrorene Gewebe. Anschließend werden RNAse-deaktivierende Chemikalien zugegeben. Nun kann die RNA bei Raumtemperatur aus dem Gemisch isoliert werden.

RNA-Isolierung: Filmsequenz (4,9 MB; aus dem Film "cDNA Microarrays for Gene Expression Analysis", G. Sawitzki et al., Heidelberg 2001).